蛋白质纯化与分析技术.pdf

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书籍描述

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《蛋白质纯化与分析技术》由中国轻工业出版社出版。

作者简介
汪少芸,博士、教授、博士生导师美国威斯康星大学麦迪逊分校(uw—Madison)和加州大学戴维斯分校(UC—Davis)博士后。从事生物活性蛋白质和功能食品的研究工作,已编写著作3部,申请发明专利19项(已授权13项),发表学术论文90篇(其中被SCI收录38篇)。担任中国食品学会青年工作委员会委员,福建省食品安全专家,福建省食品学会学术委主任;Hans Journal of Food and Nutrition Science和Food Science and Human Wellness杂志编委;多家SCI学术期刊的审稿专家。承担国家自然科学基金、国家留学归国人员基金、国家海洋公益基金、省科技厅重点项目和省自然科学基金等课题。入选福建省高校新世纪优秀人才、江苏省高层次创新人才和江海英才,获福州大学“教学名师”、“十佳科技工作者”和“新长征突击手”荣誉称号。

目录
绪论
一、蛋白质及其性质
二、蛋白质纯化的意义
三、蛋白质纯化的依据
四、蛋白质纯化的一般程序
五、蛋白质纯化方案的设计与评价
第一篇蛋白质的提取
第一章蛋白质提取的准备
第一节概述
第二节蛋白质提取的影响因素
一、缓冲液
二、温度
三、溶液极性和离子强度
四、金属离子
五、还原剂
六、去垢剂
七、蛋白酶抑制剂
第二章蛋白质提取技术
第一节总提取策略
一、原料的选择与处理
二、细胞的破碎
三、细胞器的分离
四、蛋白质提取时的保护性措施
五、蛋白质提取液的浓缩与保存
第二节具体提取策略
一、动物组织中蛋白质的提取
二、植物组织中蛋白质的提取
三、细菌体重组蛋白的提取
四、真菌中蛋白质的提取
五、动物组织亚细胞中蛋白质的提取
六、植物组织亚细胞中蛋白质的提取
七、富含多酚化合物的植物组织中酶的提取
第二篇蛋白质纯化技术
第三章沉淀法
第一节概述
第二节沉淀法的类型
一、盐析法
二、有机溶剂沉淀法
三、等电点沉淀法
四、亲和沉淀法
五、其他沉淀法
第四章透析和超滤
第一节透析
一、基本原理
二、基本操作
三、应用
第二节超滤
一、基本原理
二、超滤膜
三、基本操作
四、应用
第五章电泳技术
第一节概述
一、基本原理
二、电泳的分类
第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳
一、基本原理
二、基本操作
三、应用
第三节SDS —聚丙烯酰胺凝胶电泳
一、基本原理
二、基本操作
三、应用
第四节等电聚焦
一、基本原理
二、基本操作
三、应用
第五节双向电泳
一、基本原理
二、基本操作
三、应用
第六节毛细管电泳
一、基本原理
二、分离模式
三、应用
第六章色谱技术
第一节分子筛色谱
一、基本原理
二、色谱柱重要参数
三、分子筛色谱优缺点
四、凝胶的类型及性质
五、基本操作
六、应用
第二节离子交换色谱
一、基本原理
二、离子交换剂类型及性质
三、基本操作
四、应用
第三节亲和色谱
一、亲和色谱基本概论
二、染色配基体亲和色谱
三、凝集素亲和色谱
四、免疫亲和色谱
五、固相金属离子亲和色谱
六、嗜硫亲和色谱
第四节疏水作用色谱
一、基本原理
二、基本操作
三、应用
第五节反相色谱
一、基本原理
二、基本操作
三、应用
第六节聚焦色谱
一、基本原理
二、基本操作
三、应用
第七节灌注色谱
一、基本原理
二、灌注色谱介质
三、应用
第八节高效液相色谱
一、基本原理
二、固定相和流动相
三、基本操作
四、应用
第九节 多维液相色谱
一、基本原理
二、基本操作
三、应用
第七章特征蛋白质的纯化
第一节抗体的纯化
一、抗体的结构
二、抗体粗分离的方法
三、抗体细分离的方法
第二节膜蛋白的纯化
一、膜蛋白的结构
二、去垢剂的作用
三、膜蛋白的分离
第三节钙调蛋白的纯化
一、钙调蛋白的结构
二、钙调蛋白的分离
三、钙调蛋白的检测
第四节生物活性酶的纯化
一、尿激酶的纯化
二、激肽释放酶的纯化
三、植物溶菌酶的纯化
第五节重组蛋白包涵体的纯化
一、重组蛋白包涵体
二、重组蛋白包涵体的生物学意义
三、重组蛋白包涵体的纯化
……
第三篇蛋白质的定量与分析检测
缩略语表
参考文献

文摘
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(二)交换剂装柱
1.离子交换色谱柱
柱的高度依分离物质的不同而定,当所用的交换剂与待分离物质各组分之间的亲和力相差不多而需要交换剂的体积较大时,以增加柱长为宜,使待分离的组分被洗脱后再结合于交换剂上的概率增加,使性质相近的组分能较好地分离,因而增加了分辨率。柱的直径与高度的比以1:20左右为宜。如采用离子强度较大的洗脱液梯度洗脱时,以选用粗而短的柱子为宜。因为当柱上洗脱液的离子强度高到足以完全取代被吸附的离子时,这些被置换的离子则以同洗脱液等速率从柱上向下移动,如果柱细长,即从脱附到流出之间的距离长,使脱附的离子扩散的机会增加,结果造成分离峰过宽,降低分辨率。用交联葡聚糖离子交换剂和纤维素离子交换剂时,常用的柱高为15~20cm。
2.装柱
色谱柱垂直固定,装柱时,先将色谱柱内加入一定高度的水,一般为柱长的1/3,转型再生好的交换剂先放入烧杯,加入少量水,边搅拌边倒人柱中,使交换剂缓慢沉降。交换剂在柱内必须分布均匀,不应有明显的分界线,严防气泡产生,否则将严重影响交换性能。为防止气泡和分线(即“断层”)的出现,再加入交换剂就可借水的浮力而缓慢沉降。同时控制排液口放水速率,以保持交换剂面上水的高度不变,交换剂就会连续地缓慢沉降,避免断层和气泡的产生。

内容简介
《蛋白质纯化与分析技术》以蛋白质纯化与分析技术为核心,对其基本原理及应用实例做了详细的阐述。主要内容包括:蛋白质纯化的依据与设计、蛋白质的提取技术、蛋白质的纯化技术、特征蛋白质的纯化技术以及定量与分析检测技术。其中,蛋白质的提取技术包括蛋白质提取的准备、蛋白质的总提取、不同来源蛋白质的具体提取策略;蛋白质的纯化技术包括沉淀技术、透析和超滤、电泳技术和色谱技术;特征蛋白质的纯化技术包括抗体、钙调蛋白、膜蛋白、生物活性酶(尿激酶、激肽释放酶和植物溶菌酶)和重组蛋白包涵体的纯化;蛋白质的定量、储存与结晶包括提纯过程中的定量、提纯后的纯度标准、纯品蛋白质的储存和蛋白质的结晶等内容;蛋白质的分析与检测包括氨基酸序列分析、蛋白质免疫印迹、酶联免疫分析、质谱技术和肽图谱技术。

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