"十二五"国家级民族药学实验教学示范中心系列教材:化学生物学实验.pdf

 

书籍描述

内容简介
《化学生物学实验》在内容上主要分为两大部分。篇介绍化学生物学实验中涉及的基本实验技术,包括天然小分子化合物和蛋白质的提取分离技术、化学生物学实验分析技术以及细胞培养技术;第二篇则从化学生物学因素的分离提取与相互作用、化学生物学因素对细胞生命活动的影响和化学生物学因素对动物生命活动的影响三个不同角度,安排了35个操作性较强的学生实验进行介绍。通过本书的学习,学生可以训练化学生物学基本实验技能,巩固化学生物学基础理论知识,培养从事化学生物学科研工作的基本能力。
《化学生物学实验》是“十二五”民族药学实验教学示范中心系列教材之一,也是2015年湖北省高等学校省级教学项目“化学生物学实验课程传统与半开放模式协同教学的探索与研究(2015195)”的成果之一,可作为普通高等院校化学生物学专业、药学及相关专业开设化学生物学实验课程的教材,也可以作为从事化学生物学专业技术工作者的参考书使用。

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《"十二五"国家 级民族药学实验教学示范中心系列教材:化学生物学实验》可作为普通高等院校化学生物学专业、药学及相关专业开设化学生物学实验课程的教材,也可以作为从事化学生物学专业技术工作者的参考书使用。

作者简介
舒广文,中南民族大学药学院,副教授,编者多年从事化学生物学理论课及实验课教学工作;在化学生物学领域开展天然药物对哺乳动物免疫调节作用的研究。发表SCI收录论文近10篇,主持国家自然科学基金1项。

目录
第一篇化学生物学实验基本技术
第一章天然小分子化合物和蛋白质的提取分离技术
第一节植物提取物的制备与质量控制
第二节蛋白质的提取与纯化
第二章化学生物学实验分析技术
第一节滴定分析
第二节电泳分析
第三节生物荧光分析
第三章细胞培养技术
第二篇化学生物学综合实验
第四章化学生物学因素的分离提取与相互作用
实验一植物总DNA的提取
实验二DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验三铜配合物氧化断裂DNA研究
实验四钨酸钾一过氧化氢体系检测单链DNA中的鸟嘌呤位点
实验五四链DNA的合成及鉴定
实验六Brachet检测细胞中的DNA与RNA
实验七SDS—PAGE电泳法测定牛血清蛋白的相对分子质量
实验八多酚氧化酶的提取、蛋白质含量及催化活力测定
实验九首乌总提取物对乙酰胆碱酯酶的抑制
实验十基于核酸适配子的非标记荧光法检测凝血酶
实验十一绿原酸抗脂质过氧化能力的检测
实验十二凝胶过滤色谱法分离血红蛋白
实验十三土豆磷酸化酶的分离及直链淀粉的酶合成
实验十四大蒜SOD的提取与分离
实验十五尼龙固定化木瓜蛋白酶及其应用
实验十六植物挥发油的水蒸气回流提取
实验十七初生态微晶法制备药物纳米胶囊
实验十八果蔬中维生素C含量的测定
第五章化学生物学因素对细胞生命活动的影响
实验十九MTT法测定5氮杂胞苷对乳腺癌细胞的毒性
实验二十基于y—H2AX的免疫荧光法检测细胞中DNA双链断裂
实验二十一AnnexinV—FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡
实验二十二阳离子脂质体转染宫颈癌细胞实验
实验二十三大肠杆菌中诱导表达红色荧光蛋白
实验二十四细胞凝集反应和细胞膜通透性的观察
实验二十五聚乙二醇诱导的细胞融合
第六章化学生物学因素对动物生命活动的影响
实验二十六地塞米松诱导小鼠脾淋巴细胞凋亡
实验二十七化学生物学因素对离体蛙心舒缩活动的影响
实验二十八调节家兔呼吸运动的化学生物学因素
实验二十九辣椒素受体激动剂和抑制剂对小鼠痛觉行为的调节作用
实验三十家兔心血管活动调节的化学生物学因素
实验三十一家兔尿生成调节的化学生物学因素
实验三十二环境对斑马鱼胚胎发育的干扰检测
实验三十三高脂饲料喂养对小鼠肝脏脂肪酸β—氧化的影响
实验三十四环磷酰胺对小鼠巨噬细胞吞噬功能及NO分泌能力的影响
实验三十五黄芪多糖的提取及其对小鼠脾细胞增殖能力的影响

序言
近几十年来,生命科学各分支学科取得了巨大的进展。这些新成果鼓舞着人们不仅仅满足于在分子水平去不断认识生命现象的本质,而且更渴望依据一定的需求对生命活动进行人为干预以满足人们生产生活的需要。在生命科学飞速发展的同时,化学经历了几个世纪的发展也日趋成熟。目前,研究和解决与生命现象相关的化学问题,已经成为化学学科近几十年发展的主要动力。随着化学与生命科学的日益融合渗透,科研工作者把生物化学、结构生物学、天然产物化学、药物化学等学科有机地结合起来,提出了“化学生物学”(chemical biology)这一崭新的学科概念。美国加利福尼亚大学药学院网站主页对化学生物学给出的定义是:“composition,structure,properties,and interactions of chemicals within living organisms”,即认为化学生物学是一门研究与生命体相关化学物质的组成、结构、性质及其相互作用的学科。
发现和鉴定具有生物学活性的化合物是化学生物学的核心研究内容之一。包括中医、民族医药在内的祖国传统医学典籍记载了大量天然药材对疾病的治疗作用。这就暗示着从传统药材中制备的化学分子很有可能对与其适应证相关的生命活动具有较强的干预能力。这无疑为发现新的能够干预生命活动的化学小分子提供了重要线索。此外,化学生物学研究可以不断揭示传统医药治疗疾病的活性物质基础,为传统医药向现代化、正规化方向发展不断注入源头活水。为了适应推动祖国传统医药和化学生物学这一新兴学科有机融合的需求,中南民族大学药学院开设了化学生物学这一本科专业。本专业旨在培养具有坚实的化学与生物学基础理论知识、具有熟练的化学与相关生物学实验技能、具备从事药物研究开发和化学生物学交叉领域科学研究工作基本能力的复合型人才。
化学生物学学科是一门实验性很强的学科。化学生物学实验教学在化学生物学专业人才培养中扮演着举足轻重的作用。中南民族大学药学院化学生物学教研室的几位同仁,结合自己的教学、科研工作经历,参考国内外相关文献资料,编写了这本《化学生物学实验》教科书。本书可作为普通高等院校化学生物学专业或相关专业开设“化学生物学实验”课程的教材,也可以作为从事化学生物学专业技术工作者的参考书。从内容上看,本书大体可以分为两大部分。篇介绍化学生物学实验中可能涉及的一些基本的分离提取、定性与定量分析以及细胞培养技术;第二篇从化学生物学因素的分离提取与相互作用、化学生物学因素对细胞生命活动的影响和化学生物学因素对动物生命活动的影响三个不同角度,安排了35个操作性较强的学生实验供读者参考。其中篇的章与第二章,第二篇中实验十四、十八、二十四、二十五、三十三、三十四、三十五由舒广文编写;篇的第三章,第二篇中实验四、十、十九、二十、二十一、二十二由黄蓉编写;尹世金编写实验二十三、二十七、二十八、二十九、三十、三十一;徐婧编写实验一、三、六、八、十一、十二、三十二;帅丽编写实验二、五、七、九、十三;洪宗国编写实验十六、十七;程寒编写实验十五;胡鑫编写实验二十六。舒广文将以上内容汇编成书,洪宗国、尹世金审阅全书。
本书的编写和出版得到了民族药学实验教学示范中心的资助,得到了中南民族大学舒广文副教授主持的2015年湖北省高等学校省级教学研究项目“化学生物学实验课程传统与半开放模式协同教学的探索与研究(2015195)”的资助,得到了中南民族大学药学院领导班子的大力支持以及化学工业出版社的大力协助,在此向他们表示诚挚的谢意。
尽管我们做出了很大的努力,但由于编写时间和编者学识有限,书中对某些问题的理解难免有不妥之处,恳请读者批评指正。

编者
2015年10月
于南湖畔

文摘
版权页:



经过反复尝试,科研工作者选择了蛋白质的等电点(pI)作为对蛋白质分类的第二个依据。蛋白质是一种两性分子,在不同的pH环境中可以携带不同性质和大小的电荷。对每个蛋白质来说都有一个特定的pH值,在该pH值下蛋白质的静电荷为零,该pH值即为该蛋白质的等电点(pI)。将蛋白质样品上样到pH梯度介质上(一般是条状的)进行电泳的过程中,蛋白质分子会向与其所带电荷相反的电极方向移动。由于介质中的pH值是变化的,蛋白质分子在移动过程中将会获得或失去质子,因此蛋白质所带的电荷数和迁移速度逐步下降。当蛋白质迁移至其等电点位置时,静电荷数将为零,在电场中不再移动。这一过程被形象地称为“等电聚焦”。即电泳的结果是样品中的蛋白质分别“聚焦”到对应于它们各自pl处的pH值凝胶部位。然后再将胶条取下,置于SDS—PAGE上,进行第二次电泳,这时,蛋白质将依据分子量的大小在与第一向电泳方向垂直的方向上进行分离。通过两次电泳,理论上就可以把样品中所有的蛋白质都展开在一个二维平面上。平面上的每一个点一般只对应一种蛋白质。电泳后根据蛋白质的上样量对凝胶进行考马斯亮蓝染色、银染、荧光染色,使凝胶上面的蛋白质显现出来。

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